产品货号:
JN5069
中文名称:
DNase I(无甘油)
英文名称:
Deoxyribonuclease I(Glycerol-Free)
产品规格:
200U|2000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是一种可以将单链或双链DNA同等程度进行随机分解,生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA,其活性非常依赖于Ca2+水平,并能被Mg2+或Mn2+激活。Mg2+存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;Mn2+存在条件下,DNase I能在大约相同的位点剪切DNA的两条链,从而得到带有平末端或1~2个核苷酸突出的粘末端。本制品不包含甘油等影响冻干工艺的成分,可用于冻干反应体系的配制和产品设计。
- 制备不含DNA的RNA样品;
- RT-PCR反应前RNA样品中,去除基因组DNA等可能的DNA污染;
- 体外T7,T3,SP6等RNA聚合酶催化的体外转录后去除DNA模板;
- 用于足迹法(Footprinting)分析DNA-蛋白质相互作用;
- 与DNA聚合酶I一起用于切口平移;
- 二价锰离子存在条件下,使DNA片段化,产生DNA随机片段文库;
- 细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
37℃ 10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
组分 | 200U | 2000U |
DNase I(无甘油,1U/μL) | 200μL | 2mL |
10×Reaction Buffer with MgSO4 | 1mL | 10mL |
25mM EDTA | 1mL | 10mL |
保存:-20℃
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
使用时将酶置于冰上操作,使用完毕后-20℃保存。
10×Reaction Buffer、25mM EDTA不可用于冻干。
- 加入终浓度为2.5mM的EDTA,65℃加热10分钟,即可失活。
- 金属离子螯合剂,0.1%SDS,DTT,巯基乙醇等对酶有抑制作用。
- 加入终浓度为2.5mM的EDTA,65℃加热10分钟,即可失活。
- 去除RNA样品中污染的基因组DNA,操作步骤如下:
- 试剂溶化后,在冰上配制如下反应体系:
成分 用量 模板RNA 1μg 10×Reaction Buffer with MgSO4 1μL DNase I(1U/μL), 1μL (1U) RNase Inhibitor(40U/μL) 0.5~1μL (可不加) RNase-Free Water 至10μL - 混匀后瞬时离心,37℃孵育30分钟。
- 加入终浓度为2.5mM的EDTA,65℃加热10分钟终止反应。RNA在加热时容易降解,可以用苯酚/氯仿抽提去除DNase,乙醇沉淀RNA。
- 试剂溶化后,在冰上配制如下反应体系:
- 体外转录后去除DNA模板,操作步骤如下:
- 按照每微克DNA模板,加入2U DNase I,注意酶的用量可根据实际需要优化。
- 37℃孵育15分钟。
- 加入终浓度为2.5mM的EDTA,65℃加热10分钟终止反应。RNA在加热时容易降解,可以用苯酚/氯仿抽提去除DNase,乙醇沉淀RNA。
- 按照每微克DNA模板,加入2U DNase I,注意酶的用量可根据实际需要优化。
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